什么是內(nèi)參？

Western Blot常用來比較不同條件下或不同細(xì)胞組織中目標(biāo)蛋白表達量的相對多少，因此必須先確定上樣量相同，才有比較的基礎(chǔ)。在Western Blot實驗中，可能因總蛋白濃度測定不準(zhǔn)確，或是蛋白質(zhì)上樣時因操作產(chǎn)生誤差，所以必須設(shè)置內(nèi)部參照組來進行校正。此內(nèi)部參照必須在不同細(xì)胞或組織間表達相對恒定，且有高水平的表達量，來確保不同樣品間蛋白定量相同。而這樣的參照蛋白，就稱為內(nèi)參，對應(yīng)的抗體就稱為內(nèi)參抗體。

內(nèi)參在WB實驗中的重要性。

1 用于校正蛋白水平，確保不同樣品間蛋白定量（上樣量）相同。可從條帶粗細(xì)初步判定上樣量是否有差異。進一步使用影像分析程序?qū)⒛繕?biāo)蛋白量除以內(nèi)參含量，所得到的數(shù)值即為校正后的目標(biāo)蛋白相對含量，如此就可以進行目標(biāo)蛋白相對量的比較。

2 確認(rèn)轉(zhuǎn)膜、顯色等步驟是否均勻轉(zhuǎn)移、呈色。內(nèi)參一般選用高表達的蛋白，因此也可通過內(nèi)參的條帶，觀察WB實驗中的轉(zhuǎn)膜、顯色等步驟是否有異常。

3對文章發(fā)表絕對重要，增加實驗的可信度。文章內(nèi)放上內(nèi)參的數(shù)據(jù)，較有說服力，文獻審核者也會較相信實驗數(shù)據(jù)。

如何挑內(nèi)參抗體

通常會挑選各細(xì)胞或組織間穩(wěn)定表達、并且不受實驗影響的蛋白作為內(nèi)參，但不同的實驗還是有一些細(xì)節(jié)要注意，挑選內(nèi)參可參考下面四點：

常用內(nèi)參請見下表：